PCr引物產物長度多少合適

㈠ 半定量RT-PCR設計引物時產物長度為多少合適 我說的是產物長度的限制哦

18-25bp
產物啊,半定量無所謂吧.
這年頭為什麼還做半定量呢,直接做q-pcr也不貴啊,產物80到500bp,偶喜歡100-300bp的樣子.

㈡ pcr引物產物長度控制在多長合適

你是想問引物長度還是PCR產物長度？
引物一般20~25nt
產物在500~1000nt之間比較容易操作

㈢ pcr產物長度在800左右可以嗎

不可以。
目的基因有700多，擴增產物長度只有200。這個就是引物選擇的問題了，引物決定了擴增的起始位置，如果你選擇的引物正好是500以後的位置，那麼擴增產物長度就只有200了。

㈣ PCR引物設計時有哪些注意事項

引物設計參數：

a
引物長度一般在20bp左右，上下游引物鹼基長度不要相差超過4個鹼基。

b
引物退火溫度一般在58度，不同軟體TM使用不同的演算法，primer3，primer
5，primer
6，primer
express等一般可以設置在55-58度，beacon
design可以設置在65左右。

c
GC含量一般沒什麼特殊要求，40-60最好，如果不好設計，30-80也是可以的。

d
產物長度在100-150,80-200也可以，不要在50bp左右，那樣和引物二聚體不易區分，超過200bp可能會影響PCR擴增效率。

e
軟體給出的引物不能有發卡結構和超過3-4個鹼基的匹配，特別是3`端不能有鹼基匹配，那樣更容易形成二聚體。

f
引物設計好以後，在NCBI上做一個primer-blast，檢測一下是否有非特異性擴增。

㈤ 為什麼熒光定量PCR產物長度最好不要超過300bp

不能熒光定量PCR產旦筏測禾爻鼓詫態超卡物長度最好不要超過300bp 產物越長一次循環激發的熒光就越多達到熒光閾值需要的循環數就越少會使得CT值出現過晚,一般採用80-150bp的產物長度.

㈥ 普通的PCR,產物的長度一般要求多大合適

沒有嚴格限制,主要限制性因素是酶,KOD可能到5000bp仍然不會有錯P,但是其他的比如Taq在很少的時候就產生錯P,錯誤的PCR產物（錯P）才是我們要關注的要點

㈦ realtime pcr 引物設計原則 產物大小多少

1、引物長度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不能大於38bp； 2、引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近； 3、引物所對應的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之間，Tm值曲線以選取72度附近為佳。

㈧ 為什麼在進行pcr擴增引物設計中通常要求引物長度為20nt以上

引物濃度：引物濃度盡量按照酶的說明書給的濃度，自己再那個濃度再設置一個范圍去摸索一下。也可以按照師兄師姐給的經驗濃度自己去摸索一下，因為有時候說明書給的參數會是錯的！這個真的很坑，所以第一次做的實驗一定要找師兄師姐問清楚具體的參數和細節，避免走彎路、浪費試劑。不同的酶對引物濃度也可能會有點差別。引物濃度太低或太高了都會導致P不出來。有極少數情況，可能引物公司合成回來的引物F/R不對，比如R引物少了一半，所以引物溶解之後測一下濃度，自己根據OD和引物長度對應的摩爾量換算一下看對不對，但是這樣的情況很少，我三年只遇到過一次，這樣公司真的很坑爹！（因為我一模一樣的重復了兩次EMSA，發現結果跟之前的不對，最後排除問題發現是引物的一條少了一半，當時浪費了我一整天的時間，真的很心酸，這種奇葩的問題都能被我遇到。）如果是的話，和公司反應重新合成就行了。還有就是引物是否降解。

引物設計是否合理：這個你可以設計好之後，讓師兄師姐幫忙檢查一下，避免設計的引物有問題，導致後面實驗不斷重復還找不到原因。

3）DNA聚合酶：我們實驗室用的是KOD FX，這個酶很好用，擴增能力很強，保真性也挺高。酶要保存在-20，用的時候也要放在冰上，加完就盡快放回-20，這樣對酶的保護是比較好的，避免因為保存不當，一管酶用到後面活性下降了，導致擴增不出來。有時候一種酶擴增不出來就換一種試試，實驗只能不斷嘗試了，失敗多了就有自己的經驗了。用之前一定要認真看說明書，有時候認真看了說明書，你還能學到一些知識。