細胞凍存一管多少比較合適

① 什麼是細胞凍存細胞凍存的好處有那些

細胞凍存是將細胞放在低溫環境，減少細胞代謝以便長期儲存的一種找術。其好處是可以存儲自己免疫能力比較好的細胞為以後的健康做儲備。

② 細胞凍存，所需什麼液體，體積多少，凍存要求是什麼

生理鹽水,體積視情況而定,保存不要超過2個月

③ 細胞凍存液怎麼配

10%-15%（常見為10%）的DMSO或甘油，含10%-20%血清的凍存培養液。

一般來講血清含量可以在10%-90%之間調整，凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養，另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護細胞。

有人親測10%血清凍存細胞，結果證明是可以的，但高血清比例的凍存液更有助於提高細胞活力，此外嬌貴的細胞可以適當提高凍存液中血清的比例以保證獲得更高的存活率及活力。

(3)細胞凍存一管多少比較合適擴展閱讀

細胞凍存和復甦的原則：

慢凍速融，這樣更加有利於保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。

常用的凍存保護劑為二甲基亞碸（DMSO）和甘油，凍存細胞時加入保護劑，一方面可以提高細胞膜對水的通透性，另一方面使冰點降低，延緩凍結過程。

緩慢凍存細胞的過程中，加入保護劑可以使細胞內水分滲出到細胞外，一定程度上減少胞內冰晶的產生，而在快速復甦細胞的過程中，能使胞外冰晶迅速融化，防止水分滲入胞內再次形成冰晶而損傷細胞。

④ 細胞凍存的操作步驟是什麼

1.
配製含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養液；
2.
取對數生長期的細胞，去除舊培養液，用PBS清洗。
3.
去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養皿表面）把單層生長的細胞消化下來；
4.
離心1000rpm，5min；
5.
去除胰蛋白酶，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；
6.
將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5
ml；
7.
在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；
8.
凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/
min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h
，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
細胞凍存管融化
1.將細胞凍存管取出，浸入37℃水浴鍋內，輕輕晃動，注意融化，當融得只剩一個小冰塊時，將細胞插入冰中。
2.加入4℃預冷的培養基，用手指輕彈懸浮細胞團。
3.250g離心10min，去除上清液，再加入培養基，輕輕懸浮。
4.盡量將細胞中的DMSO洗去，計數。
在細胞凍存過程中，所結的冰晶對細胞傷害較大，所以過程一定要慢，DMSO能減少冰晶傷害。在細胞復甦過程中，要快，以減少融化對細胞的傷害，其實還是冰晶的問題。DMSO浸潤的細胞非常脆弱，所以可要盡快將DMSO去除，一定要輕。

⑤ 請問主細胞庫和工作細胞庫的細胞代次不得超過多少代還有它的凍存密度要多少 有急用！！！謝謝了~~

細胞分好幾種，一般常用VERO細胞，正常工作傳代代次不得超過150代，因此可以按你需要確定主代細胞及工作細胞代次，一般主代135代，工作代139代，可以更低。一般凍存密度5000000~10000000個細胞/ml，每2ml凍存管加1.5ml

⑥ 聚丙烯細胞凍存管有哪些規格

2毫升和5毫升，實驗室用的晶安生物2毫升冷凍管，希望可以幫到您。

⑦ 臍靜脈內皮細胞凍存時一個管凍多少細胞

50萬個左右，1.8ml的凍存管

⑧ 細胞傳代幾次凍存比較合適

原代分離的細胞最好在3代以內，如果是無限傳代細胞無所謂

⑨ 如何凍存細胞

一、材料
(一)儀器
1.
凈化工作台
2.
離心機
3.
恆溫水浴箱
4.
冰箱(4℃、-20℃、-70℃)
5.
倒置相差顯微鏡
6.
培養箱
7.
液氮冰箱
(二)玻璃器皿
1.
吸管(彎頭、直頭)
2.
培養瓶
3.
玻璃瓶(250ml、100ml)
4.
廢液缸
(三)塑料器皿
1.
吸頭
2.
槍頭
3.
膠塞
4.
移液管(10ml)
5.
15ml離心管
6.
凍存管(1~2ml)
(四)其他物品
1.
微量加樣槍
2.
紅血球計數板
3.
記號筆
4.
醫用橡皮膏
5.
移液槍
(五)試劑
1.
D-Hanks液
2.
小牛血清
3.
培養液
4.
雙抗(青黴素、鏈黴素)
5.
胰蛋白酶(0.08%)
6.
1NHCl
7.
7.4%NaHCO3
8.
DMSO(分析純)或無色新鮮甘油
二、操作步驟
(一)細胞凍存
1.
配製含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養液;
2.
取對數生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中、;
3.
離心1000rpm，5min;
4.
去除胰蛋白酶及舊的培養液，加入適量配製好的凍存培養液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數，調節凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml~1×107/ml;
5.
將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5
ml;
6.
在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;
7.
凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/
min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/
min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h
，然後放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
(二)
細胞復甦
1.
從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，並不時搖動令其盡快融化。
2.
從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管並滴加10倍以上培養液，混勻;
3.
離心，
1000rpm，5min;
4.
棄去上清液，加入含10%小牛血清培養液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養瓶，37℃培養箱靜置培養;
5.
次日更換一次培養液，繼續培養。
三、注意事項
1.從增殖期到形成緻密的單層細胞以前的培養細胞都可以用於凍存，但最好為對數生長期細胞。在凍存前一天最好換一次培養液;
2.將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護工作，以免凍傷;
3.凍存和復甦最好用新配製的培養液。

⑩ 細胞凍存的操作步驟

細胞凍存
1.預先配製凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預冷；
2.用胰酶對細胞進行消化：倒去培養瓶中的培養基或用槍小心吸去培養板中的培養基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細胞（盡可能溫和）；
3.再次用完全培養液懸浮細胞，將預冷的凍存液加入消化完全的細胞中，用滴管輕輕吹打混勻。
4.在每支凍存管中加入1ml細胞液，密封後標記凍存細胞名稱和凍存日期。
5.凍存步驟的細致直接關繫到細胞復甦時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；然後轉到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。

這是我實驗中用的protocol，

希望能夠幫到你~