pcr熔解溫度一般是多少

1. pcr退火溫度怎麼確定

熔解溫度（Tm）是引物的一個重要參數。這是當50％的引物和互補序列表現為雙鏈DNA分子時的溫度.Tm對於設定PCR退火溫度是必需的。在理想狀態下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火， 同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設定比引物的 Tm低5℃。
設定Tm有幾種公式。有的是來源於高鹽溶液中的雜交，適用於小於18鹼基的引物。 有的是根據GC含量估算Tm。確定引物Tm最可信的方法是近鄰分析法。這種方法從序列一級結構和相鄰鹼基的特性預測引物的雜交穩定性。大部分計算機程序使用近鄰分析法。
根據所使用的公式及引物序列的不同，Tm會差異很大。因為大部分公式提供一個估算的Tm值，所有退火溫度只是一個起始點。可以通過分析幾個逐步提高退火溫度的反應以提高特異性。開始低於估算的Tm5℃，以2℃為增量，逐步提高退火溫度。較高的退火溫度會減少引物二聚體和非特異性產物的形成。
為獲得最佳結果，兩個引物應具有近似的Tm值。引物對的Tm差異如果超過5℃，就會引物在循環中使用較低的退火溫度而表現出明顯的錯誤起始。如果兩個引物Tm不同，將退火溫度設定為比最低的Tm低5℃
或者為了提高特異性，可以在根據較高Tm設計的退火溫度先進行5個循環，然後在根據較低Tm設計的退火溫度進行剩餘的循環。這使得在較為嚴緊的條件下可以獲得目的模板的部分拷貝。

2. pcr退火溫度一般為多少

唉,這種題就是中國特色,完全理論脫離實際.
PCR退火溫度是一個范圍,一般是50度到65度,或者到70度做兩步法PCR.其中,模板的GC含量、模板的組成（單一模板還是cDNA還是全基因組DNA還是別的什麼）等等條件都會影響tm值.沒有一個確定的說是多少比較好,都是具體情況具體分析.有的時候引物設計回來,還要做溫度梯度測驗,設計的tm不一定就是最適合的tm.不得不說這題直接問一個數,純屬是閉門造車,一點實驗經歷都沒有隻憑空想,答對了也沒有得到任何有用的知識.
好了,如果非要說一個數的話,那麼習慣上是55度左右.選項中我更傾向於56度的答案.50度還是偏低,對於稍微復雜的模板來說,非特異性擴增的可能性會增大.

3. 酵母菌液PCR所需裂解溫度是多少

您好，酵母是純天然的微生物。
高於47℃的溫度下,酵母細胞一般不能生長,最適生長溫度一般在20℃~30℃.
發酵溫度是40-42℃.
酵母細胞55～56℃幾分鍾就被殺死.
建議您在使用時可以先用溫水化開。
如果您想了解酵母，可以點擊這里：http://www.exploreyeast.com.cn/yeast-a-to-z

4. PCR反應溫度怎麼設置

在pcr反應過程中，要使用三個不同的溫度變化，有變性，退火，擴增三個不同的反應階段，而這三個反應需要的最適溫度不同。具體設置如下：

1、變性反應溫度的設置

當溫度控制在90 °C以上時DNA會發生變性，雙鏈DNA解鏈成單鏈。

2、退火反應溫度的設置

當溫度下降到50 °C的時候，DNA復性，兩種引物通過鹼基互補配對與兩條單鏈DNA結合。

3、擴增反應溫度的設置

當溫度上升到72 °C左右時延伸，DNA 聚合酶在此時有最大活性，能夠催化4 種脫氧核苷酸合成新的DNA鏈。

(4)pcr熔解溫度一般是多少擴展閱讀：

PCR溫度與時間的設置：

基於PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標准反應中採用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火並結合到靶序列上，然後快速升溫至70～75℃，在Taq DNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。

對於較短靶基因（長度為100～300bp時）可採用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般採用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性）。

復性的溫度 PCR 擴增是否順利的關鍵因素，通常在50-60℃之間。具體的溫度主要由引物的Tm值決定。延伸溫度絕大多數設定為72℃ 。如果復性的溫度很高，可以將延伸溫度和復性溫度設置成同一溫度，變成二步法PCR 。

變性步驟一般使用30 秒鍾，如果模板的 G+C 含量較高，或直接用細胞做模板，變性時間可適當延長。復性時間有 30 秒種一般是足夠的。延伸時間由擴增產物的大小決定，一般採用 1kb 用 1 分鍾來保證充足的時間。

5. 怎樣確定pcr反應溫度

要是用引物設計軟體比如Primer設計的引物，軟體會直接顯示Tm值；如果不是的話，可以按下面這個公式計算：
大於10bp，Tm=81.5+41[GC%]-[675/引物長度]
小於10bp，Tm=[（GC%*總鹼基數）*4]+{[(1.00-GC%)*引物長度]*2}
變性溫度一般是94度，延伸溫度72度

6. 普通pcr的退化溫度最低為多少

最低可以設置到40℃左右，但理想的退火溫度是55到70℃。

7. PCR反應溫度怎麼設置

要是用引物設計軟體比如primer設計的引物，軟體會直接顯示tm值；如果不是的話，可以按下面這個公式計算：
大於10bp，tm=81.5+41[gc%]-[675/引物長度]
小於10bp，tm=[（gc%*總鹼基數）*4]+{[(1.00-gc%)*引物長度]*2}
變性溫度一般是94度，延伸溫度72度

8. 實時定量PCR的繪制溶解曲線應該從多少度開始升溫

如果擴增產物只有目標序列的話就應該只有一個峰的。

1.簡單的說來，溶解曲線就是在採用熒光染料法進行實時定量PCR時採用的一種分析手段。當體系的溫度逐漸升高的時候，體系中的PCR產物慢慢的由雙鏈變成單鏈，這是一個逐漸變化的過程。由於熒光染料能插入到雙鏈DNA中而發光，單鏈不發光，因此可以看到熒光的變化。在實時熒光PCR儀中都應該自帶分析軟體，看溶解曲線主要是看其峰在什麼位置，不同的核酸會有不同的峰。同一核酸的峰差別應該不大，一般能控制在正負0.5度內。

2.溶解曲線是做染料法定量pcr時，用到的一種結果分析方法。

一般染料法定量pcr在進行完pcr後都要運行熔解曲線，一般設定先94度幾分鍾，然後驟冷到65度（假定65度為退夥溫度）。在65度時，pcr產物是以雙鏈的形式存在的，因為染料是插到雙鏈dna的小溝里然後發熒光的，所以這個時候檢測到很強的光信號，隨著溫度升高，雙鏈逐漸打開，熒光信號逐漸減弱。因為理論上要檢測的樣本長度一定，所以到達某一個溫度的時候，應該全部解鏈，我們假設在88 度的時候pcr產物全部解鏈，這個時候就是我們在熔解曲線圖上看到的所有曲線同時驟然下滑的那個點，一般把最高溫設定在94度左右。如果下滑點不在一個溫度，說明不是一種產物。

9. pcr退火溫度怎麼確定

熔解溫度（Tm）是引物的一個重要參數。這是當50％的引物和互補序列表現為雙鏈DNA分子時的溫度.Tm對於設定PCR退火溫度是必需的。在理想狀態下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，
同時還要足夠高，以減少非特異性結合。合理的退火溫度從55℃到70℃。退火溫度一般設定比引物的
Tm低5℃。
設定Tm有幾種公式。有的是來源於高鹽溶液中的雜交，適用於小於18鹼基的引物。
有的是根據GC含量估算Tm。確定引物Tm最可信的方法是近鄰分析法。這種方法從序列一級結構和相鄰鹼基的特性預測引物的雜交穩定性。大部分計算機程序使用近鄰分析法。
根據所使用的公式及引物序列的不同，Tm會差異很大。因為大部分公式提供一個估算的Tm值，所有退火溫度只是一個起始點。可以通過分析幾個逐步提高退火溫度的反應以提高特異性。開始低於估算的Tm5℃，以2℃為增量，逐步提高退火溫度。較高的退火溫度會減少引物二聚體和非特異性產物的形成。
為獲得最佳結果，兩個引物應具有近似的Tm值。引物對的Tm差異如果超過5℃，就會引物在循環中使用較低的退火溫度而表現出明顯的錯誤起始。如果兩個引物Tm不同，將退火溫度設定為比最低的Tm低5℃
或者為了提高特異性，可以在根據較高Tm設計的退火溫度先進行5個循環，然後在根據較低Tm設計的退火溫度進行剩餘的循環。這使得在較為嚴緊的條件下可以獲得目的模板的部分拷貝。

10. PCR的延伸溫度一般在什麼范圍之內

七十至七十五攝氏度。
反應的延伸溫度一般選擇在七十至七十五攝氏度之間，常用溫度為七十二攝氏度。過高的延伸溫度不利於引物和模板的結合。是指聚合酶鏈式反應，是擴增的一種方法，實驗中很常用。包括高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應。
延伸時間應該保證聚合酶可以完成擴增長度。另外一個考量是總延伸時間，也就是單位循環的延伸時間乘以循環數。超過一定循環數後效率會開始下降，而暴露在高溫下的酶也有其壽命和保真效率的限制。因此依需要的前提下，循環數如果較多，延伸時間可以略微保守，而如果循環數不需太多，延伸時間也可以更加寬松，保證完全的擴增。