pcr模板濃度多少合適

⑴ 模板的濃度對PCR有什麼影響，一般要多大濃度

那要看你用的是什麼模板了。
pcr的靈敏度很高，幾pg的DNA就能檢測出來了。一般用pcr產物或者質粒做模板，只需要1ng左右就可以了，如果是基因組或者cDNA做模板，模板量可適當增加。

⑵ PCR引物濃度一般選多少

PCR引物濃度一般選5～20μmol/L。

PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即：引物(PCR引物為DNA片段，細胞內DNA復制的引物為一段RNA鏈）、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）。

引物有多種設計方法，由PCR在實驗中的目的決定，但基本原則相同。PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴增效率高但易發生錯配。Pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據需要必須做不同的選擇。

模板即擴增用的DNA，可以是任何來源，但有兩個原則，第一純度必須較高，第二濃度不能太高以免抑制。

緩沖液的成分最為復雜，除水外一般包括四個有效成分：緩沖體系，一般使用HEPES或MOPS緩沖體系；一價陽離子，一般採用鉀離子，但在特殊情況下也可使用銨根離子；二價陽離子，即鎂離子。

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PCR技術的基本原理類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：

①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；

②模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合；

③引物的延伸：DNA模板-引物結合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈，重復循環變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的「半保留復制鏈」。

而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2～4分鍾，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

⑶ pcr反應對模板DNA濃度的最低要求是多少

模板DNA濃度主要看你的PCR擴增體系所使用的酶：

1、一般普通的酶，DNA模板量在50到100ng都可以擴增出來的

2、高效一點的酶，幾ng也可以擴增出來的。

⑷ 我想問PCR擴增時使用的DNA模板濃度一般多大加多少

提取DNA後的電泳條帶如果不是特別暗，PCR時如果總體系是25μl，DNA模板加0.7～1μl都行，自己摸索下。

做PCRDNA模板太多不好，有點就行～

⑸ 我想問PCR擴增時使用的DNA模板濃度一般多大加多少

我們一般不去特意檢測提取的得到的模板濃度,純度倒是要注意一下,紫外分光達到1.8即可,不過我們一般也不去檢測.
PCR的時候可以設置梯度,分別加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μl.
不要低於0.5μl,也不要高於3μl.選擇幾個梯度做一下看看哪個效果好就用哪個.有時候為了省錢,就直接用1μl上去P,一般問題不大,出了問題再回頭做梯度也不遲.
總而言之,使得模板量在1μl左右最好.

⑹ 土壤細菌總DNA pcr模板量一般多少

2ng左右，還高或過低pcr效果都不好，特別是模板量過高pcr是很難成功的，樓主可以測一下模板濃度，一般是25ul的反應體系中含有2ng左右的DNA效果比較好。

⑺ 10uL體系PCR模板濃度該多少

你大擴換體系了？升高2、3度試試 ，個人經驗之談，遇到過一次升了2度就好了，什麼都沒換，沒想通為什麼

⑻ PCR摸索模板濃度時遇到的問題!!!!

這個問題很難回答到底是什麼原因，因為這可能與PCR儀有關，也可能與加樣時的操作有關。另外電泳時是否有問題也可以看一下。
最好多做幾次看看。

⑼ 熒光定量pcr模板濃度的選擇

濃度太低～Ct值太大～PCR完成後可能模板數還沒進入平台期～總之Ct值應位於指數期～不能落於前面的雜信號階段也不能落於後面的平台期～