蛋白上樣濃度多少合適

㈠ 【求助】WB上樣量應為多少

>這要根據你做的蛋白表達量多少，一般是用DAB顯色要50-100μg，用ecl曝光上樣量為20-40μg。但根據你蛋白表達量的不同目標蛋白絕對量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。我也用組織作過western，蛋白濃度的確很高。
通常我上50-100ug，足夠了。如果蛋白濃度太高導致上樣過小，可用裂解液稀釋蛋白使總上樣體積在10ul即可，勿用水稀釋會改變PH值。
上樣不要過高，否則條帶兜一大坨，不好看。
具體還得在試驗後確定，如果內參出來，目的蛋白不出來，可能表明目的蛋白豐度低，上樣量相對不足可在增加上樣量試試。
當然目的蛋白不出來的原因有很多：）這只是從上樣的角度考慮。好的，多謝我前幾天預示了一下，倒是有條帶，我我算了一下就150-160μg,請問一下各位，加這么高的量可以嗎？關鍵是你自己分析一下你底預實驗結果，最後得到清晰而不太濃密底條帶最好。其實WB控制最後顯示底條帶不僅可以控制上樣量，還可以控制WB整個過程中底許多環節，所以不要怕試，多做幾次濃度剃度底預實驗，比在後面老是瞎作一氣好。還有具體多少量確實別人也不能幫你回答。上多少沒關系，關鍵是能上得去，並且跑出來有條帶。如果只在160ug能做出來就用160ug.