wb目的蛋白含量多少比較合適

❶ western blot總蛋白定量必要嗎

總蛋白定量是標准程序．

由於跑膠的時候每個點樣孔，每個跑道有一定的容量，加多了會堵塞，加太少則有可能檢測不到，造成假陰性。所以有必要對總蛋白量有所控制。但是對有經驗的人士來說，做到適量的加樣確實不需要分光光度計測量那種精度。

是否有必要定量還是取決於實驗的目的。比如，如果不能夠定量顯示兩個跑道加樣量相同，則無法根據一粗一細兩條帶來證明粗條帶的樣品目的蛋白質表達水平較細條帶樣品高。當然，你的內參如果顯示出一樣的均勻的條帶，則可以解決這個問題。但是如果總蛋白不定量，內參均勻純粹是個碰運氣一樣的事，如果內參粗粗細細亂七八糟，如何解釋實驗結果呢？

沒有聽說過加BSA補齊這碼事情。

各孔蛋白量不同，只要各孔蛋白量都在膠的容量范圍內，理論上來說不影響電泳結果。

❷ 蛋白濃度多少做western-blot比較合適

Western-blot是一種半定量的檢測手段。 個人認為如果要通過灰度值來計算蛋白濃度，那就是和內參來做對比，因為內參的濃度是已知且單一條帶的蛋白樣品。通過待測樣品盒內參樣品灰度值做對比可以算出待測樣品大概的濃度。

❸ 【求助】WB上樣量應為多少

>這要根據你做的蛋白表達量多少，一般是用DAB顯色要50-100μg，用ecl曝光上樣量為20-40μg。但根據你蛋白表達量的不同目標蛋白絕對量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。我也用組織作過western，蛋白濃度的確很高。
通常我上50-100ug，足夠了。如果蛋白濃度太高導致上樣過小，可用裂解液稀釋蛋白使總上樣體積在10ul即可，勿用水稀釋會改變PH值。
上樣不要過高，否則條帶兜一大坨，不好看。
具體還得在試驗後確定，如果內參出來，目的蛋白不出來，可能表明目的蛋白豐度低，上樣量相對不足可在增加上樣量試試。
當然目的蛋白不出來的原因有很多：）這只是從上樣的角度考慮。好的，多謝我前幾天預示了一下，倒是有條帶，我我算了一下就150-160μg,請問一下各位，加這么高的量可以嗎？關鍵是你自己分析一下你底預實驗結果，最後得到清晰而不太濃密底條帶最好。其實WB控制最後顯示底條帶不僅可以控制上樣量，還可以控制WB整個過程中底許多環節，所以不要怕試，多做幾次濃度剃度底預實驗，比在後面老是瞎作一氣好。還有具體多少量確實別人也不能幫你回答。上多少沒關系，關鍵是能上得去，並且跑出來有條帶。如果只在160ug能做出來就用160ug.

❹ Western-blot實驗中,蛋白上樣一般多少含量

看你的蛋白樣品是純度很高的單一條帶樣品還是未經純化較多雜帶的樣品.
如果是單一條帶的樣品10微克的上樣量就足夠了,如果是細胞裂解液這樣的樣品可以提高一些上樣量30~80微克的樣子.
Western-blot的理論檢出限很低,可以低至皮克級,但是實際應用還需要考慮抗體的效價等影響因素.

❺ Western-blot實驗中，蛋白上樣一般多少含量

蛋白上樣多少含量取決於SDS-PAGE上樣量是多少
根據實際效果來看，一般來講蛋白量控制在2~5微克Western-blot顯印的效果比較好。上樣量太少可能顯印不出來（WB理論檢測限是皮克級），上樣量太大顯印後可能面積太大顏色過深，對判斷可能會有帶來干擾。

❻ wb 怎麼定量 是用目的蛋白除以內參蛋白嗎

actin
gapdh
萬能內參
主要看你的目標蛋白的分子量多大，「目標蛋白要與內參蛋白的分子量差異大！」
方便檢測
核蛋白，有很多種，分子量不同
膜蛋白，有很多很多種，分子量不同
漿蛋白，有成千上萬種，分子量不同。
具體實驗，具體目的蛋白，具體的內參。

❼ Western-blot實驗中，蛋白上樣一般多少含量

根據你的目的蛋白的豐度以及抗體靈敏性調整，一般建議在10-30ug左右常規蛋白基本都可以。

❽ Western-blot實驗中，蛋白上樣一般多少含量

看目的蛋白的含量進行調整。
義翹細胞裂解液樣品的蛋白上樣量一般為30µg。

❾ wb跑內參和目的蛋白區別

wb跑內參和目的蛋白區別：wb跑內參內參通常是在被檢樣本中高表達且表達水平相對穩定的蛋白。WB可以對目的蛋白進行半定量分析，判斷不同樣品中目的蛋白表達含量的多少，就是取決於內參的標定。

WB又稱為免疫印跡 (immune blot) ，是根據抗原抗體的特異性結合半定量的檢測樣品中的某種蛋白的方法。

蛋白質印跡 (Western Blot)，作為檢測蛋白表達及半定量的基礎實驗方法。

很多蛋白的表達是有組織特異性的，例如IL-10R，在視網膜，脾臟和肺腺癌組織中有高表達，其他組織表達含量較低；還有一些蛋白，則需要特定的刺激條件才會高表達，這種情況往往在磷酸化蛋白及炎症因子蛋白等中較為常見，如果未做特殊的處理，目的蛋白表達含量很低，無法被WB檢測出。

內參是western blot法非常重要而必須的部分。它保證了目的蛋白表達量的相對多少。內參是指由細胞中管家基因編碼的蛋白，其在各組織細胞中的表達相對穩定，因此在測定目的蛋白的相對水平時常用它做對照物。

內參抗體，是WB實驗中的重要參考，WB可以對目的蛋白進行半定量分析，判斷不同樣品中目的蛋白表達含量的多少，就是取決於內參的標定。內參選擇在WB實驗中是很關鍵的因素，可不是GAPDH或者β-actin萬用的哦。

內參如何選擇，最重要的決定因素就是目的蛋白，尤其是目的蛋白的表達位置及預處理條件。

❿ 目的蛋白和內參分子量差別多少合適

保險起見，相差15KD以上比較好，因為如果兩個蛋白條帶太寬，加上一些非特異性條帶，還有顯影時的本底著色，會使效果不理想，不具備說服力。