收蛋白離心時溫度要多少

1. ctab法提取植物葉子dna，離心過程中對溫度的要求一定要是4度嗎沒這個條件的話對dna的降解是不是影響很大

最好是4度，沒有低溫冷凍離心機也沒關系，普通離心機室溫下也可以，少許的降解對一般實驗的影響並不大。DNA純化過程中確實有一些小的細節，對DNA的得率和純度影響比較大，如清洗的時候一定要溫和，清洗後溶解的時間也要合適等等。

2. 蛋白質樣品的制備要注意哪些事項

1. 避免冷凍乾燥
盡管有一些蛋白是經冷凍乾燥處理後長出了晶體，但是大多數情況下並非如此。所以要盡可能避免冷凍乾燥。如果蛋白已經這樣了，准備點晶體之前，要用水或者緩沖液透析，除掉非揮發性的試劑和其他化學物質。

2. 避免硫酸銨沉澱
避免硫酸銨沉澱法作為純化的最後一步或使用硫酸銨沉澱法來濃縮蛋白。因為硫酸銨很難除干凈，對後續的結晶過程造成干擾。殘存的微量的硫酸銨也會干擾晶體篩選的條件，造成結果的不可重復性。微量的硫酸銨也容易造成樣品沉澱，以及在PEG和鹽類物質存在時會出現過量的晶核。

3. 蛋白批次
在同一次條件篩選時，要避免樣品不是同一批次純化出來的。每一次純化的條件和步驟都是不同的〔就像天下沒有兩片相同的樹葉（Redondo添加）〕，所以篩選的時候應該使用同一批次純化出來的蛋白。

4. 定性蛋白質
在拿去點晶體之前，應該定性判斷你純化出來的蛋白是不是你的目的蛋白。根據確定了的蛋白質性質，可以給篩選和優化提供參考。常用的蛋白質定性試驗包括：
SDS-PAGE
Native PAGE
Dynamic Light Scattering
IEF (Isoelectric Focusing) Gel
Mass Spectros
根據這些試驗的結果，我們可以判斷：
蛋白樣品的純度
蛋白樣品的同次性
不同批次純化出來的蛋白的性質差異
蛋白質的穩定性

5. 蛋白需要達到什麼純度？
要拿去篩晶體，蛋白樣品需要達到什麼純度？答案是越純越好。但是這樣一個答案不能讓人滿意。如何能更容易理解一些呢？一開始篩選時，根據考馬斯亮藍染色判斷蛋白純度應該達到90 到 95%。不過，考慮到總有進一步純化的步驟，不可能達到『絕對』的100%純，所以沒有必要追求『絕對』純，存在一點點的雜質蛋白是可以接受的。還要記住，結晶本身就是一個純化過程。當篩選過程中沒有晶體長出，甚至沒有長的跡象，或者在優化條件時不能進一步提高晶體的質量了，這個時候就要考慮進一步提高蛋白濃度了。

6. 樣品的保存
一般蛋白都可以在4°C 或 -70°C保存。與制備樣品的人交流一下或者查閱文獻中報道的類似蛋白的保存方法，選擇一個合適的緩沖液體系和保存溫度。在保存之前，應該測定蛋白的活性和穩定性，並隔一段時間取出一點蛋白來測定其活性是否改變及有沒有降解發生。反復凍溶對蛋白是不利的，應盡量避免。樣品應該分裝成小份，每次取出當次試驗需要的量，保證取出來的正好用完。有時候，一些人喜歡加入甘油（10 to 50% v/v）來保護蛋白不被凍傷。但是應該盡量避免加入甘油，因為甘油很難通過透析或者過濾來除干凈，殘存的甘油會給長晶體帶來變數。甘油在不同條件下可能是沉澱劑，也可能是additive（促溶劑？）或冷凍保護劑。一般來講，蛋白濃度越高越利於保存。但是，當蛋白濃度很高時，保存期間也容易產生沉澱。將保存的蛋白做好標記，是何批次純化的，蛋白濃度多高，以及保存的時間等。將同一個批次的蛋白分裝好保存到同一個大的離心管里，這樣方便管理。

7. 蛋白樣品操作中要注意的
Be nice to your protein.要記得蛋白可是微生物們的美餐，不要讓它們偷吃了你的蛋白。平時，蛋白一定要在4° C或更低溫度放置，暴露在室溫的時間要盡可能地短。當溶化一個蛋白樣品或將冷凍乾燥的蛋白復溶的時候，不要搖晃或震盪，不要產生氣泡，出現氣泡往往標志著蛋白變性了。當確定了點晶體時操作間的溫度，應預先將蛋白樣品在這個溫度放置一會兒。在蛋白結晶的領域里存在很多的不同的主張。比如，有人認為在點晶體之前應過濾蛋白除掉可能存在的細菌和蛋白聚集體及雜質等，而有人在認為不應該過濾或離心，那些並不明顯的蛋白聚集體或雜質等可能是結晶所需的晶核。

8. 要不要加疊氮化鈉？
NaN3是一種有效抑制細菌污染的添加劑。常用的工作濃度為1 mM或0.02% 到 0.1% w/v.因為疊氮化鈉有毒，所以操作時一定要小心。當決定添加疊氮化鈉了，就需要注意以下幾點：
它能殺菌，對人體也是有害的。
它是某些蛋白的抑制劑，可能影響試驗。
It can interfere with heavy atom derivatization.
一些疊氮化物是爆炸性的
有報道指出除掉疊氮化鈉能促進晶體生長
可以替代疊氮化鈉的試劑有麝香草酚（Thymol）和Thimerosal。
還有其他的方法，那就是每一步操作時都保證儀器和器材（滅菌槍頭等）都是無菌的，溶液都要過濾除菌，並在4°C或更低溫度保存。所有這些細節都做好了，就可以避免使用化學添加劑來防菌了。

9. 試驗記錄要做好
純化，保存，點晶體等每一個步驟都應該詳細記錄。篩晶體時各個條件也都要做好記錄以備需要時查閱。這些需要記錄的項目包括：
有關這個蛋白的信息
樣品名稱
樣品的純化批次，保存地點及時間，保存條件等
蛋白緩沖液的成分，添加劑濃度等
樣品濃度
結晶試驗的信息
方法
液滴大小及成分
池液的成分
溫度
日期
實驗者
乍看起來這有些過於拘泥細枝末節，但是要知道所記錄下的這些信息都可能成為結晶篩選的一個變數。做詳盡准確的試驗記錄是必要的。在記錄結晶的情況時，一些描述性的和定量的記錄都應該有。最後，還有保持操作間的整潔衛生，避免化學物質和細菌的污染。好的習慣長遠來看會讓人受益良多。

10. 關於你的樣品還應該掌握的信息：
是否有同源性很高的蛋白已經解出結構了？
樣品中存在自由的半胱氨酸嗎？
樣品中有哪些添加劑？
樣品上是否有糖基？
樣品蛋白是否是磷酸化的？
樣品N端是否甲基化？
樣品在什麼溫度下穩定？
樣品的活性和穩定性隨溫度如何改變？
樣品的可溶性和穩定性隨pH如何變化？
樣品結合金屬離子嗎？
樣品對蛋白酶敏感否？
我的樣品屬於酶，膜蛋白，抗體？
對這類的蛋白通常使用什麼方法？
樣品蛋白的來源？
蛋白樣品到達我手上之前如何純化和保存的？
樣品的緩沖液體系？
是否同一批次純化出來的？
我手上有多少蛋白？我還能獲得多少？
蛋白純度如何？
均一性同次性如何？
這個蛋白獨特的性質是什麼？

3. 提蛋白時，為什麼要在4度下離心

主要是為了保持低溫。因為離心本身也會產生一定的熱，而蛋白在熱的環境下可能變性或酶解，所以要在低溫下進行離心。

4. 為啥血液離心時，離心機要在4°c

因為血液在離心時，由於離心機主軸及各部位軸承轉動，會產生熱量，而機內又是密閉的，熱量無法散出，導致機內溫度升高，血液中的蛋白質會失活變質，所以要加冷凝夾套。

5. 蛋白質分離提純方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法：

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑：

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

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吸附層析

1、吸附柱層析

吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。

2、薄層層析

薄層層析是以塗布於玻板或滌綸片等載體上的基質為固定相，以液體為流動相的一種層析方法。這種層析方法是把吸附劑等物質塗布於載體上形成薄層，然後按紙層析操作進行展層。

3、聚醯胺薄膜層析

聚醯胺對極性物質的吸附作用是由於它能和被分離物之間形成氫鍵。這種氫鍵的強弱就決定了被分離物與聚醯胺薄膜之間吸附能力的大小。

層析時，展層劑與被分離物在聚醯胺膜表面競爭形成氫鍵。因此選擇適當的展層劑使分離在聚醯胺膜表面發生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續過程，就能導致分離物質達到分離目的。

6. 表達蛋白收菌為什麼要4度

低溫主要是為了避免收集菌體或者發酵液的過程中可能出現的目的蛋白降解，變性。
一般較高的溫度(37度）更適宜大腸桿菌的生長，當誘導完成之後如果繼續保持較高溫度，可能會增加菌液中的其他代謝產物，這些東西可能會造成目的蛋白的降解。而蛋白本身在大腸桿菌內折疊完成，如果溫度過高，可能會使一些折疊好的但並不穩定的結構被破壞，造成蛋白變性。

7. 提蛋白時,為什麼要在4度下離心

蛋白在低溫時離心：1不損失活性 2抑制蛋白酶活性，防止離心時蛋白被分解

8. 一般蛋白質變性溫度是多少

蛋白是一種極其重要的 營養元素，人體內絕大多數組織都需要蛋白來出示動能，因而，身體對蛋白的使用量是極大的。而蛋白是一種相對穩定的物質，僅有在一定獨特標准下能會出現轉性的主要表現，下邊就討論一下蛋白幾度轉性呢？期待大夥兒可以了解一下這些方面的內容吧。

蛋白質多少度變性

蛋白在40度以上就早已有轉性的發展趨勢，60度上下會剛開始轉性。一般來說,食品中蛋白的遇熱轉性功效產生於約60℃。

蛋白是構成身體一切體細胞、組織的關鍵成份。機體全部關鍵的構成部分都需要有蛋白的參加。一般說，蛋白約占身體所有品質的18%，最重要的還是其與生命現象相關。

每頓飯食材必須有一定質和量的蛋白．身體沒有為蛋白開設存儲庫房，假如一次服用過多的蛋白，必然導致消耗．反過來如食材中蛋白不夠時，青少年兒童發育不全，成人會覺得睏乏，體重下降，抗病能力變弱。

蛋白質多少度變性

服用蛋白要以充足的發熱量供應為前提條件．假如發熱量供應不夠，身體將耗費食材中的蛋白來作電力能源。1克蛋白在身體空氣氧化時出示的發熱量是18kJ，與葡萄糖非常。用蛋白作電力能源是一種消耗，是屈才。

蛋白質多少度變性

蛋白在遭受陽光照射、熱、溶劑及其一些變性劑的功效時，次級鍵受到損壞，造成純天然構象的毀壞，使蛋白的生物活性缺失。假如轉性標准強烈長久，蛋白的轉性是不可逆的。假如轉性標准不強烈，這類轉性功效是可逆性的，表明蛋白質分子內部構造的轉變並不大。這時候，假如去除轉性要素，在適度標准下轉性蛋白可修復其純天然構象和生物活性，這類狀況稱之為蛋白復性。比如胃蛋白酶加溫至80～90℃時，喪失溶解度，也無消化吸收蛋白的工作能力，如將溫度再減少到37℃，則又可修復溶解度和消化吸收蛋白的工作能力。

9. 24 小時尿蛋白檢測用尿收集時的溫度

早上8時准應把膀胱內的尿量排清並棄去，開始計時，把24小時所排出的尿全部貯存在一容器內(包括第二天早上8時准解出的尿，全部送檢查。溫度沒有太大的要求，但是不能太高

10. 提取蛋白酶離心時溫度是多少

這要看具體是哪種蛋白酶了
一般情況下，為保護蛋白酶的活性離心溫度是在4度~8度左右
某些特殊的蛋白酶可能在高一些溫度下活性更高，所以離心溫度要考慮合適該蛋白酶的活性的溫度