细胞冻存一管多少比较合适

① 什么是细胞冻存细胞冻存的好处有那些

细胞冻存是将细胞放在低温环境，减少细胞代谢以便长期储存的一种找术。其好处是可以存储自己免疫能力比较好的细胞为以后的健康做储备。

② 细胞冻存，所需什么液体，体积多少，冻存要求是什么

生理盐水,体积视情况而定,保存不要超过2个月

③ 细胞冻存液怎么配

10%-15%（常见为10%）的DMSO或甘油，含10%-20%血清的冻存培养液。

一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞。

有人亲测10%血清冻存细胞，结果证明是可以的，但高血清比例的冻存液更有助于提高细胞活力，此外娇贵的细胞可以适当提高冻存液中血清的比例以保证获得更高的存活率及活力。

(3)细胞冻存一管多少比较合适扩展阅读

细胞冻存和复苏的原则：

慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。

常用的冻存保护剂为二甲基亚砜（DMSO）和甘油，冻存细胞时加入保护剂，一方面可以提高细胞膜对水的通透性，另一方面使冰点降低，延缓冻结过程。

缓慢冻存细胞的过程中，加入保护剂可以使细胞内水分渗出到细胞外，一定程度上减少胞内冰晶的产生，而在快速复苏细胞的过程中，能使胞外冰晶迅速融化，防止水分渗入胞内再次形成冰晶而损伤细胞。

④ 细胞冻存的操作步骤是什么

1.
配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液；
2.
取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。
3.
去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）把单层生长的细胞消化下来；
4.
离心1000rpm，5min；
5.
去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml；
6.
将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5
ml；
7.
在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；
8.
冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/
min；当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h
，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
细胞冻存管融化
1.将细胞冻存管取出，浸入37℃水浴锅内，轻轻晃动，注意融化，当融得只剩一个小冰块时，将细胞插入冰中。
2.加入4℃预冷的培养基，用手指轻弹悬浮细胞团。
3.250g离心10min，去除上清液，再加入培养基，轻轻悬浮。
4.尽量将细胞中的DMSO洗去，计数。
在细胞冻存过程中，所结的冰晶对细胞伤害较大，所以过程一定要慢，DMSO能减少冰晶伤害。在细胞复苏过程中，要快，以减少融化对细胞的伤害，其实还是冰晶的问题。DMSO浸润的细胞非常脆弱，所以可要尽快将DMSO去除，一定要轻。

⑤ 请问主细胞库和工作细胞库的细胞代次不得超过多少代还有它的冻存密度要多少 有急用！！！谢谢了~~

细胞分好几种，一般常用VERO细胞，正常工作传代代次不得超过150代，因此可以按你需要确定主代细胞及工作细胞代次，一般主代135代，工作代139代，可以更低。一般冻存密度5000000~10000000个细胞/ml，每2ml冻存管加1.5ml

⑥ 聚丙烯细胞冻存管有哪些规格

2毫升和5毫升，实验室用的晶安生物2毫升冷冻管，希望可以帮到您。

⑦ 脐静脉内皮细胞冻存时一个管冻多少细胞

50万个左右，1.8ml的冻存管

⑧ 细胞传代几次冻存比较合适

原代分离的细胞最好在3代以内，如果是无限传代细胞无所谓

⑨ 如何冻存细胞

一、材料
(一)仪器
1.
净化工作台
2.
离心机
3.
恒温水浴箱
4.
冰箱(4℃、-20℃、-70℃)
5.
倒置相差显微镜
6.
培养箱
7.
液氮冰箱
(二)玻璃器皿
1.
吸管(弯头、直头)
2.
培养瓶
3.
玻璃瓶(250ml、100ml)
4.
废液缸
(三)塑料器皿
1.
吸头
2.
枪头
3.
胶塞
4.
移液管(10ml)
5.
15ml离心管
6.
冻存管(1~2ml)
(四)其他物品
1.
微量加样枪
2.
红血球计数板
3.
记号笔
4.
医用橡皮膏
5.
移液枪
(五)试剂
1.
D-Hanks液
2.
小牛血清
3.
培养液
4.
双抗(青霉素、链霉素)
5.
胰蛋白酶(0.08%)
6.
1NHCl
7.
7.4%NaHCO3
8.
DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油
二、操作步骤
(一)细胞冻存
1.
配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;
2.
取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、;
3.
离心1000rpm，5min;
4.
去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;
5.
将细胞分装入冻存管中，每管1~1.5
ml;
6.
在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;
7.
冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/
min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/
min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h
，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。
(二)
细胞复苏
1.
从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2.
从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀;
3.
离心，
1000rpm，5min;
4.
弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养;
5.
次日更换一次培养液，继续培养。
三、注意事项
1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液;
2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤;
3.冻存和复苏最好用新配制的培养液。

⑩ 细胞冻存的操作步骤

细胞冻存
1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷；
2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）；
3.再次用完全培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐）最好；或者可以在4℃，2h；然后转到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。

这是我实验中用的protocol，

希望能够帮到你~