pcr熔解温度一般是多少

1. pcr退火温度怎么确定

熔解温度（Tm）是引物的一个重要参数。这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火， 同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 Tm低5℃。
设定Tm有几种公式。有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。 有的是根据GC含量估算Tm。确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。大部分计算机程序使用近邻分析法。
根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。因为大部分公式提供一个估算的Tm值，所有退火温度只是一个起始点。可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。
为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5℃，就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃
或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

2. pcr退火温度一般为多少

唉,这种题就是中国特色,完全理论脱离实际.
PCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR.其中,模板的GC含量、模板的组成（单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还是别的什么）等等条件都会影响tm值.没有一个确定的说是多少比较好,都是具体情况具体分析.有的时候引物设计回来,还要做温度梯度测验,设计的tm不一定就是最适合的tm.不得不说这题直接问一个数,纯属是闭门造车,一点实验经历都没有只凭空想,答对了也没有得到任何有用的知识.
好了,如果非要说一个数的话,那么习惯上是55度左右.选项中我更倾向于56度的答案.50度还是偏低,对于稍微复杂的模板来说,非特异性扩增的可能性会增大.

3. 酵母菌液PCR所需裂解温度是多少

您好，酵母是纯天然的微生物。
高于47℃的温度下,酵母细胞一般不能生长,最适生长温度一般在20℃~30℃.
发酵温度是40-42℃.
酵母细胞55～56℃几分钟就被杀死.
建议您在使用时可以先用温水化开。
如果您想了解酵母，可以点击这里：http://www.exploreyeast.com.cn/yeast-a-to-z

4. PCR反应温度怎么设置

在pcr反应过程中，要使用三个不同的温度变化，有变性，退火，扩增三个不同的反应阶段，而这三个反应需要的最适温度不同。具体设置如下：

1、变性反应温度的设置

当温度控制在90 °C以上时DNA会发生变性，双链DNA解链成单链。

2、退火反应温度的设置

当温度下降到50 °C的时候，DNA复性，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。

3、扩增反应温度的设置

当温度上升到72 °C左右时延伸，DNA 聚合酶在此时有最大活性，能够催化4 种脱氧核苷酸合成新的DNA链。

(4)pcr熔解温度一般是多少扩展阅读：

PCR温度与时间的设置：

基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。

对于较短靶基因（长度为100～300bp时）可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸（此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性）。

复性的温度 PCR 扩增是否顺利的关键因素，通常在50-60℃之间。具体的温度主要由引物的Tm值决定。延伸温度绝大多数设定为72℃ 。如果复性的温度很高，可以将延伸温度和复性温度设置成同一温度，变成二步法PCR 。

变性步骤一般使用30 秒钟，如果模板的 G+C 含量较高，或直接用细胞做模板，变性时间可适当延长。复性时间有 30 秒种一般是足够的。延伸时间由扩增产物的大小决定，一般采用 1kb 用 1 分钟来保证充足的时间。

5. 怎样确定pcr反应温度

要是用引物设计软件比如Primer设计的引物，软件会直接显示Tm值；如果不是的话，可以按下面这个公式计算：
大于10bp，Tm=81.5+41[GC%]-[675/引物长度]
小于10bp，Tm=[（GC%*总碱基数）*4]+{[(1.00-GC%)*引物长度]*2}
变性温度一般是94度，延伸温度72度

6. 普通pcr的退化温度最低为多少

最低可以设置到40℃左右，但理想的退火温度是55到70℃。

7. PCR反应温度怎么设置

要是用引物设计软件比如primer设计的引物，软件会直接显示tm值；如果不是的话，可以按下面这个公式计算：
大于10bp，tm=81.5+41[gc%]-[675/引物长度]
小于10bp，tm=[（gc%*总碱基数）*4]+{[(1.00-gc%)*引物长度]*2}
变性温度一般是94度，延伸温度72度

8. 实时定量PCR的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温

如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的。

1.简单的说来，溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量PCR时采用的一种分析手段。当体系的温度逐渐升高的时候，体系中的PCR产物慢慢的由双链变成单链，这是一个逐渐变化的过程。由于荧光染料能插入到双链DNA中而发光，单链不发光，因此可以看到荧光的变化。在实时荧光PCR仪中都应该自带分析软件，看溶解曲线主要是看其峰在什么位置，不同的核酸会有不同的峰。同一核酸的峰差别应该不大，一般能控制在正负0.5度内。

2.溶解曲线是做染料法定量pcr时，用到的一种结果分析方法。

一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线，一般设定先94度几分钟，然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）。在65度时，pcr产物是以双链的形式存在的，因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的，所以这个时候检测到很强的光信号，随着温度升高，双链逐渐打开，荧光信号逐渐减弱。因为理论上要检测的样本长度一定，所以到达某一个温度的时候，应该全部解链，我们假设在88 度的时候pcr产物全部解链，这个时候就是我们在熔解曲线图上看到的所有曲线同时骤然下滑的那个点，一般把最高温设定在94度左右。如果下滑点不在一个温度，说明不是一种产物。

9. pcr退火温度怎么确定

熔解温度（Tm）是引物的一个重要参数。这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下，退火温度足够低，以保证引物同目的序列有效退火，
同时还要足够高，以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的
Tm低5℃。
设定Tm有几种公式。有的是来源于高盐溶液中的杂交，适用于小于18碱基的引物。
有的是根据GC含量估算Tm。确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法。这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。大部分计算机程序使用近邻分析法。
根据所使用的公式及引物序列的不同，Tm会差异很大。因为大部分公式提供一个估算的Tm值，所有退火温度只是一个起始点。可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的Tm5℃，以2℃为增量，逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。
为获得最佳结果，两个引物应具有近似的Tm值。引物对的Tm差异如果超过5℃，就会引物在循环中使用较低的退火温度而表现出明显的错误起始。如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃
或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。

10. PCR的延伸温度一般在什么范围之内

七十至七十五摄氏度。
反应的延伸温度一般选择在七十至七十五摄氏度之间，常用温度为七十二摄氏度。过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。是指聚合酶链式反应，是扩增的一种方法，实验中很常用。包括高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应。
延伸时间应该保证聚合酶可以完成扩增长度。另外一个考量是总延伸时间，也就是单位循环的延伸时间乘以循环数。超过一定循环数后效率会开始下降，而暴露在高温下的酶也有其寿命和保真效率的限制。因此依需要的前提下，循环数如果较多，延伸时间可以略微保守，而如果循环数不需太多，延伸时间也可以更加宽松，保证完全的扩增。