氯霉素生产反应温度多少合适
‘壹’ 怎样检测氯霉素
(组织)氯霉素(CAP)j胶体金快速检测卡用于快速检测水产品(鱼虾蟹等)、畜禽肉及水体沉积物中的氯霉素残留,整个检测过程只需要30分钟左右,本试纸条为定性检测,检测卡灵敏度为0.2ppb。
(水体)氯霉素(CAP)j胶体金快速检测卡用于快速检测水体中的氯霉素残留,整个检测过程只需要10分钟左右,本试纸条为定性检测,灵敏度为0.3ppb。
检测原理:
氯霉素检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理,样品中的氯霉素在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合,抑制了抗体和NC膜检测线(T)上氯霉素-蛋白偶联物的结合。如果样品中氯霉素含量大于0.2ppb,检测线(T)线显色比C线浅,结果为阳性;反之,检测线(T)显色比质控线(C)深或者一样深,结果为阴性。
结果判定:
1、 阴性(-):检测线(T)显色比质控线(C)深或者一样深,表示样品中氯霉素浓度低于检测限或者不含氯霉素。
2、 阳性(+):检测线(T)线显色比C线浅,或者检测线(T)不显色,表示样品中氯霉素残留浓度大于检测限。
3、 无效:质控线(C)不显色;可能是操作不当或者检测卡失效。用新的检测卡重新检测。
‘贰’ 氯霉素耐受温度能在高温下灭菌么
不耐受。不能。
氯霉素属于抗生素,所有抗生素都要在培养基高温高压灭菌后通过无菌操作加入。
‘叁’ 300°以上的高温能否令氯霉素失效
会,高温环境会破坏所有抗生素的结构,从而使之失去药效。
‘肆’ 抗生素在100度左右温度下失效吗
不同类型的抗生素的热稳定性不同的。
氯霉素类抗生素,如氯霉素,热稳定性很好,即使煮沸5小时都对抗菌效果无影响。
内酰胺类(大部分青霉素类衍生物抗生素)以及大环内酯类抗生素(红霉素等)在高温下容易开环,而氨基糖苷类等抗生素热稳定性就好一些。
比如在我们生物学研究中,氨苄霉素(内酰胺类)的热稳定性就弱于卡那霉素(氨基糖苷类)。氨基糖苷类抗生素,常见的有庆大霉素、卡那霉素、链霉素、新霉素。
抗生素的种类、特性、作用和适用范围
大环内酯类
常用的有红霉素、克拉霉素、罗红霉素、阿奇霉素、交沙霉素、麦迪霉素、螺旋霉素等
适用于:
呼吸道、皮肤软组织感染,特别适用于支原体、衣原体和军团菌所引起的感染,对青霉素过敏者可选用此类抗生素。红霉素是老牌抗生素,价格便宜,对于军团菌和支原体感染的肺炎具有相当好的疗效,而价格非常高的碳青霉烯类的抗生素和三代头孢菌素对付这些病不如红霉素。克拉霉素还可用于治疗幽门螺旋杆菌感染。
提醒:
此类抗生素主要不良反应有胃肠道反应(如恶心、腹痛、腹泻等)及肝功能异常。
青霉素类
常用的有青霉素G、青霉素V、甲氧西林(新青I)、氨苄西林(氨苄青霉素)、阿莫西林(羟氨苄青霉素)、替卡西林(羧噻吩青霉素)、哌拉西林(氧哌嗪青霉素)等
适用于:
呼吸道、皮肤软组织、泌尿生殖道感染等。主要优点为杀菌作用强,毒副作用少,孕妇及儿童使用较为安全。
提醒:
主要不良反应为过敏反应,包括过敏性休克、过敏性皮炎、血清病、皮疹、接触性皮炎等。
头孢菌素类
第一代:有头孢氨苄(先锋4号)、头孢唑林(先锋5号)、头孢拉定(先锋6号)以及头孢羟氨苄等
适用于:
呼吸道、皮肤软组织、泌尿生殖道感染等
第二代:常见的有头孢呋辛、头孢孟多、头孢替安、头孢呋辛酯、头孢克洛等
比第一代抗菌谱广、抗G-菌作用比第一代强,但抗G+菌的作用不如第一代,肾脏毒性低;
第三代:常用的有头孢噻肟、头孢他定、头孢曲松、头孢哌酮、头孢唑肟、头孢克肟等
适用于:
呼吸道、皮肤软组织、泌尿生殖系统、胃肠道感染和败血症等;具有抗菌谱广、抗G-菌活性比第二代强、抗G+菌的作用不如第二代,体内分布广、对人体毒性低等特点。
第四代:目前已上市的有头孢吡肟、头孢匹罗等,抗菌谱优于前三代。
氨基糖苷类
是广谱抗生素,庆大霉素、阿米卡星(丁胺卡那霉素)、妥布霉素、依替米星、奈替米星为常用品种
适用于:
对革兰阴性杆菌有良好的杀菌作用,适用于下呼吸道、泌尿道、肠道感染等。不同的品种特点不同。其中,依替米星、奈替米星抗菌活性较强、耳肾毒性较低;链霉素现主要用于治疗结核;大观霉素(壮观霉素)可用于治疗淋病;新霉素因耳毒性大,仅用于口服和局部外用。
喹诺酮类
抗菌谱广、抗菌作用强的抗菌药物,主要有诺氟沙星(氟哌酸)、依诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、培氟沙星、司帕沙星、莫西沙星等
适用于:
诺氟沙星主要用于肠道感染与尿路感染;依诺沙星和培氟沙星可治疗全身感染包括呼吸道感染、皮肤软组织感染、尿路感染、胃肠道和胆道感染、妇科感染等;环丙沙星是目前应用最广的品种,适用于治疗全身各处的感染,安全有效;氧氟沙星、左氧氟沙星、莫西沙星对呼吸道感染效果最好
提醒:
主要不良反应有头痛、头晕、呕吐、腹泻、皮疹、精神异常等。
碳青霉烯类
亚胺培南、美罗培南等是迄今开发的抗菌药物中抗菌谱最广、抗菌作用最强的一类
适用于:
全身各处感染
提醒:
剂量偏高时可引起惊厥、抽搐、头痛等中枢神经系统的不良反应。
‘伍’ 氯霉素试剂盒被污染了怎么处理
解决方法
室温太高(大于25 ℃ ) 保持实验室温度20-25℃,避免在热源或阳光直射处实验
底物溶液受到污染 若发现底物溶液已经变色,不要再使用
反应时间太长 请严格控制实验反应时间
酶结合物污染了试剂盒中其他试剂 使用过的吸头立即丢弃,每次吸取不同的试剂要更换新的吸头,凡是试剂(特别是酶结合物和底物)接触过的容器立即清洗干净
使用了质量差的水 尝试用蒸馏水配制溶液
•问题四、一个或多个标准品数据点超出曲线范围
可能原因 解决方法
洗涤过程不正确 洗涤时确保每个微孔加样量一致;每次洗涤时间不要太长(导致过度洗板),也不要太短(洗板不彻底),一般10s左右;洗涤步骤完成后立即进行下一步骤
微孔中的试剂未充分混匀 试剂加完后,在振荡器上振荡混匀(没有振荡器可轻敲板四周或在桌面上做圆周运动使其充分混匀)
阴性标准品受到污染 严格按照试剂盒的操作说明进行实验
加入标准品和试剂的时间不一致 确保一切就绪,由低浓度到高浓度快速添加标准品并保证不被打扰 美国进口普卫欣天 猫有效防雾霾出门做好防护
标准品添加顺序混乱或放置错误位置 按照说明要求重复试验并保证由低到高的顺序依次添加
标准品被污染或与其他标准品混淆 改用新标准品
标准品加样量不准 确保加样的准确性
‘陆’ 氯霉素的注意事项
1.由于可能发生不可逆性骨髓抑制,本品应避免重复疗程使用。
2.肝、肾功能损害患者宜避免使用本品,如必须使用时须减量应用,有条件时进行血药浓度监测,使其峰浓度在25mg/L以下,谷浓度在5mg/L以下。如血药浓度超过此范围,可增加引起骨髓抑制的危险。
3.在治疗过程中应定期检查周围血象,长程治疗者尚须查网织细胞计数,必要时作骨髓检查,以便及时发现与剂量有关的可逆性骨髓抑制,但全血象检查不能预测通常在治疗完成后发生的再生障碍性贫血。
4.对诊断的干扰:采用硫酸铜法测定尿糖时,应用氯霉素患者可产生假阳性反应。
孕妇及哺乳期妇女用药
由于氯霉素可透过胎盘屏障,对早产儿和足月产新生儿均可能引起毒性反应,发生“灰婴综合征”,因此在妊娠期,尤其是妊娠末期或分娩期不宜应用本品。
本品自乳汁分泌,有引致哺乳婴儿发生不良反应的可能,包括严重的骨髓抑制反应,因此本品不宜用于哺乳期妇女,必须应用时应暂停哺乳。
儿童用药
新生儿由于肝脏酶系统未发育成熟,肾脏排泄功能又差,药物自肾排泄较成人缓慢,故氯霉素应用于新生儿易导致血药浓度过高而发生毒性反应(灰婴综合征),故新生儿不宜应用本品,有指征必须应用本品时,如有条件应在监测血药浓度条件下使用。
老年患者用药
老年患者组织器官大多退化,功能减退,自身免疫功能亦降低,氯霉素可致严重不良反应,故老年患者应慎用。
‘柒’ 在微生物培养时氯霉素什么时候加
液体培养基灭菌后将其温度冷去至室温加入氯霉素;固体培养基在灭菌后,当温度降至能用手支持大约5-6秒即可加入氯霉素。
‘捌’ 氯霉素能加热容化吗,会失效吗
不能加热,会发生化学反应的。
‘玖’ 检测氯霉素的行业标准
氯霉素检验方法 --这是我们公司现在使用的方法,发上来大家指导指导
1. 试剂与材料
1.1氯霉素试剂盒,德国r-Biopharm公司
1.2乙酸乙酯,分析纯
1.3双蒸水
2.仪器与设备
2.1微孔板酶标仪,MuLtisKan Ascent,芬兰Labsystens公司。
2.2 8道移液器,50-300uL
2.3 单道移液器,5-50ul,20-200ml,100-1000ul,1-5ml
2.4 离心机。
2.5 旋转蒸发器,配真空冷却系统。
2.6 液体混匀器。
3.样品前处理
3.1样品提取 称取约2g(准确至0.01g)蜂蜜于20ml具塞试管中,加入用4ml双蒸水溶解,再加4ml乙酸乙酯,在混匀器上混匀10分钟。将上述样液转至10ml离心管中,以4000转/分离心12分钟
3.2净化 从上述离心管中移取1ml上层的乙酸乙酯(相当于0.5样品)至另一试管中,60℃以下减压旋转蒸干,残留物用0.5ml缓冲液1溶液,此为样品溶液,供酶标仪测定
4.测定
4.1 酶标仪测定条件
酶标仪测定波长为450nm
4.2 酶标测定(以下操作在20-24℃室温条件下进行)
4.2.1测定之前的准备工作
将氯霉素酶试剂盒附带的所有试剂回升至室温20-24℃。其中氯霉素酶标记物、氯霉素抗体用缓冲液1以1;11的比例稀释,在吸取浓缩液之前,要仔细振摇使之充分混匀
4.2.2 标准应用的制备;50uL标准浓缩液(氯霉素试剂盒附带)用450uL缓冲液1稀释并混合均匀用玻璃不能用塑料瓶
标准应用液1:50uL标准浓缩液1用450uL缓冲液1稀释oppt
标准应用液2:50uL标准浓缩液2用450uL缓冲液1稀释50ppt
标准应用液3:50uL标准浓缩液3用450uL缓冲液1稀释150ppt
标准应用液4:50uL标准浓缩液4用450uL缓冲液1稀释450 ppt
标准应用液5:50uL标准浓缩液5用450uL缓冲液1稀释1350ppt
标准应用液6:50uL标准浓缩液6用450uL缓冲液1稀释4050ppt
4.2.3.测定程序:
取出实验需要数量的微孔板条,按顺序加入50ul标准或处理好的样品到各自的微孔中,加入50ul稀%@FI
释了的酶标记物到微孔底部,加入50ul稀释了的抗体溶液到每一个微孔中充分混合(轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动以混均)用薄膜覆盖板上在室温孵育2小时(注意在加入抗体的过程中移液器管尖千万不要接触到放进孔中的液体,避免交叉污染)
倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打(拍打4次)以保证完全除去孔中的液体,用250ul蒸馏水充入孔中(轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动),再次倒掉微孔中液体,重复操作两遍。注意在洗板过程中加洗涤水的移液器管尖必须置于微孔板上方约1厘米处打出洗涤水。洗板后立即进行下一步
操作不要让板孔干燥。
迅速加入50ul基质及50ul发色剂到每一个孔中,轻轻振荡板并在桌面做圆
周运动以混均。室温孵育微孔板30分钟,注意暗处避光放置。在恒温孵育期间准备好反应停止液
加入100ul反应停止液,混匀。立即测量,如果不能立即测量请放置在暗处并于60分钟内450nm测量OD值
5.试剂空白
以2 ml双蒸水代替样品,按上述步骤提取
6结果与计算
6.1绘制标准曲线法
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)的吸光度值再乘以100,因此0标准等于100%,吸光度值的百分比表示。
标准(或样品)的吸光度值360
×100 = %吸光度
0标准的吸光度值
计算标准的值并绘成一个以氯霉素浓度(ng/kg)为半对数坐标系统的曲线图,曲线在50-1350ng/kg(ppt)范围内应当成为线性。相对应每一个样品的浓度(ng/kg)可以从校正曲线上读出。为了获得样品中氯霉素的实际浓度(ng/kg),从校正曲线上读出的浓度值必须乘以相对应的稀释系数。(可采用Labsystens公司提供的MuLtisKan Ascent软件,从计算机上编制测定程序并进行数据处理,可直接读取样品氯霉素的浓度值)。7.方法的检出限、回收率
7.1本方法氯霉素的检出限为125ng/kg(ppt)
7.2 回收率: 90%
对蜂蜜样品进行的回收率实验,结果如下表示.
样品本底值(ng/kg)添加值(ng/kg)测定值回收率
蜂蜜