pcr模板浓度多少合适

⑴ 模板的浓度对PCR有什么影响，一般要多大浓度

那要看你用的是什么模板了。
pcr的灵敏度很高，几pg的DNA就能检测出来了。一般用pcr产物或者质粒做模板，只需要1ng左右就可以了，如果是基因组或者cDNA做模板，模板量可适当增加。

⑵ PCR引物浓度一般选多少

PCR引物浓度一般选5～20μmol/L。

PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。

引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。

模板即扩增用的DNA，可以是任何来源，但有两个原则，第一纯度必须较高，第二浓度不能太高以免抑制。

缓冲液的成分最为复杂，除水外一般包括四个有效成分：缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；二价阳离子，即镁离子。

(2)pcr模板浓度多少合适扩展阅读

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；

②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”。

而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

⑶ pcr反应对模板DNA浓度的最低要求是多少

模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶：

1、一般普通的酶，DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的

2、高效一点的酶，几ng也可以扩增出来的。

⑷ 我想问PCR扩增时使用的DNA模板浓度一般多大加多少

提取DNA后的电泳条带如果不是特别暗，PCR时如果总体系是25μl，DNA模板加0.7～1μl都行，自己摸索下。

做PCRDNA模板太多不好，有点就行～

⑸ 我想问PCR扩增时使用的DNA模板浓度一般多大加多少

我们一般不去特意检测提取的得到的模板浓度,纯度倒是要注意一下,紫外分光达到1.8即可,不过我们一般也不去检测.
PCR的时候可以设置梯度,分别加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μl.
不要低于0.5μl,也不要高于3μl.选择几个梯度做一下看看哪个效果好就用哪个.有时候为了省钱,就直接用1μl上去P,一般问题不大,出了问题再回头做梯度也不迟.
总而言之,使得模板量在1μl左右最好.

⑹ 土壤细菌总DNA pcr模板量一般多少

2ng左右，还高或过低pcr效果都不好，特别是模板量过高pcr是很难成功的，楼主可以测一下模板浓度，一般是25ul的反应体系中含有2ng左右的DNA效果比较好。

⑺ 10uL体系PCR模板浓度该多少

你大扩换体系了？升高2、3度试试 ，个人经验之谈，遇到过一次升了2度就好了，什么都没换，没想通为什么

⑻ PCR摸索模板浓度时遇到的问题!!!!

这个问题很难回答到底是什么原因，因为这可能与PCR仪有关，也可能与加样时的操作有关。另外电泳时是否有问题也可以看一下。
最好多做几次看看。

⑼ 荧光定量pcr模板浓度的选择

浓度太低～Ct值太大～PCR完成后可能模板数还没进入平台期～总之Ct值应位于指数期～不能落于前面的杂信号阶段也不能落于后面的平台期～