wb目的蛋白含量多少比较合适

❶ western blot总蛋白定量必要吗

总蛋白定量是标准程序．

由于跑胶的时候每个点样孔，每个跑道有一定的容量，加多了会堵塞，加太少则有可能检测不到，造成假阴性。所以有必要对总蛋白量有所控制。但是对有经验的人士来说，做到适量的加样确实不需要分光光度计测量那种精度。

是否有必要定量还是取决于实验的目的。比如，如果不能够定量显示两个跑道加样量相同，则无法根据一粗一细两条带来证明粗条带的样品目的蛋白质表达水平较细条带样品高。当然，你的内参如果显示出一样的均匀的条带，则可以解决这个问题。但是如果总蛋白不定量，内参均匀纯粹是个碰运气一样的事，如果内参粗粗细细乱七八糟，如何解释实验结果呢？

没有听说过加BSA补齐这码事情。

各孔蛋白量不同，只要各孔蛋白量都在胶的容量范围内，理论上来说不影响电泳结果。

❷ 蛋白浓度多少做western-blot比较合适

Western-blot是一种半定量的检测手段。 个人认为如果要通过灰度值来计算蛋白浓度，那就是和内参来做对比，因为内参的浓度是已知且单一条带的蛋白样品。通过待测样品盒内参样品灰度值做对比可以算出待测样品大概的浓度。

❸ 【求助】WB上样量应为多少

>这要根据你做的蛋白表达量多少，一般是用DAB显色要50-100μg，用ecl曝光上样量为20-40μg。但根据你蛋白表达量的不同目标蛋白绝对量DAB法至少50pg，ecl法至少20pg。我也用组织作过western，蛋白浓度的确很高。
通常我上50-100ug，足够了。如果蛋白浓度太高导致上样过小，可用裂解液稀释蛋白使总上样体积在10ul即可，勿用水稀释会改变PH值。
上样不要过高，否则条带兜一大坨，不好看。
具体还得在试验后确定，如果内参出来，目的蛋白不出来，可能表明目的蛋白丰度低，上样量相对不足可在增加上样量试试。
当然目的蛋白不出来的原因有很多：）这只是从上样的角度考虑。好的，多谢我前几天预示了一下，倒是有条带，我我算了一下就150-160μg,请问一下各位，加这么高的量可以吗？关键是你自己分析一下你底预实验结果，最后得到清晰而不太浓密底条带最好。其实WB控制最后显示底条带不仅可以控制上样量，还可以控制WB整个过程中底许多环节，所以不要怕试，多做几次浓度剃度底预实验，比在后面老是瞎作一气好。还有具体多少量确实别人也不能帮你回答。上多少没关系，关键是能上得去，并且跑出来有条带。如果只在160ug能做出来就用160ug.

❹ Western-blot实验中,蛋白上样一般多少含量

看你的蛋白样品是纯度很高的单一条带样品还是未经纯化较多杂带的样品.
如果是单一条带的样品10微克的上样量就足够了,如果是细胞裂解液这样的样品可以提高一些上样量30~80微克的样子.
Western-blot的理论检出限很低,可以低至皮克级,但是实际应用还需要考虑抗体的效价等影响因素.

❺ Western-blot实验中，蛋白上样一般多少含量

蛋白上样多少含量取决于SDS-PAGE上样量是多少
根据实际效果来看，一般来讲蛋白量控制在2~5微克Western-blot显印的效果比较好。上样量太少可能显印不出来（WB理论检测限是皮克级），上样量太大显印后可能面积太大颜色过深，对判断可能会有带来干扰。

❻ wb 怎么定量 是用目的蛋白除以内参蛋白吗

actin
gapdh
万能内参
主要看你的目标蛋白的分子量多大，“目标蛋白要与内参蛋白的分子量差异大！”
方便检测
核蛋白，有很多种，分子量不同
膜蛋白，有很多很多种，分子量不同
浆蛋白，有成千上万种，分子量不同。
具体实验，具体目的蛋白，具体的内参。

❼ Western-blot实验中，蛋白上样一般多少含量

根据你的目的蛋白的丰度以及抗体灵敏性调整，一般建议在10-30ug左右常规蛋白基本都可以。

❽ Western-blot实验中，蛋白上样一般多少含量

看目的蛋白的含量进行调整。
义翘细胞裂解液样品的蛋白上样量一般为30µg。

❾ wb跑内参和目的蛋白区别

wb跑内参和目的蛋白区别：wb跑内参内参通常是在被检样本中高表达且表达水平相对稳定的蛋白。WB可以对目的蛋白进行半定量分析，判断不同样品中目的蛋白表达含量的多少，就是取决于内参的标定。

WB又称为免疫印迹 (immune blot) ，是根据抗原抗体的特异性结合半定量的检测样品中的某种蛋白的方法。

蛋白质印迹 (Western Blot)，作为检测蛋白表达及半定量的基础实验方法。

很多蛋白的表达是有组织特异性的，例如IL-10R，在视网膜，脾脏和肺腺癌组织中有高表达，其他组织表达含量较低；还有一些蛋白，则需要特定的刺激条件才会高表达，这种情况往往在磷酸化蛋白及炎症因子蛋白等中较为常见，如果未做特殊的处理，目的蛋白表达含量很低，无法被WB检测出。

内参是western blot法非常重要而必须的部分。它保证了目的蛋白表达量的相对多少。内参是指由细胞中管家基因编码的蛋白，其在各组织细胞中的表达相对稳定，因此在测定目的蛋白的相对水平时常用它做对照物。

内参抗体，是WB实验中的重要参考，WB可以对目的蛋白进行半定量分析，判断不同样品中目的蛋白表达含量的多少，就是取决于内参的标定。内参选择在WB实验中是很关键的因素，可不是GAPDH或者β-actin万用的哦。

内参如何选择，最重要的决定因素就是目的蛋白，尤其是目的蛋白的表达位置及预处理条件。

❿ 目的蛋白和内参分子量差别多少合适

保险起见，相差15KD以上比较好，因为如果两个蛋白条带太宽，加上一些非特异性条带，还有显影时的本底着色，会使效果不理想，不具备说服力。