收蛋白离心时温度要多少

1. ctab法提取植物叶子dna，离心过程中对温度的要求一定要是4度吗没这个条件的话对dna的降解是不是影响很大

最好是4度，没有低温冷冻离心机也没关系，普通离心机室温下也可以，少许的降解对一般实验的影响并不大。DNA纯化过程中确实有一些小的细节，对DNA的得率和纯度影响比较大，如清洗的时候一定要温和，清洗后溶解的时间也要合适等等。

2. 蛋白质样品的制备要注意哪些事项

1. 避免冷冻干燥
尽管有一些蛋白是经冷冻干燥处理后长出了晶体，但是大多数情况下并非如此。所以要尽可能避免冷冻干燥。如果蛋白已经这样了，准备点晶体之前，要用水或者缓冲液透析，除掉非挥发性的试剂和其他化学物质。

2. 避免硫酸铵沉淀
避免硫酸铵沉淀法作为纯化的最后一步或使用硫酸铵沉淀法来浓缩蛋白。因为硫酸铵很难除干净，对后续的结晶过程造成干扰。残存的微量的硫酸铵也会干扰晶体筛选的条件，造成结果的不可重复性。微量的硫酸铵也容易造成样品沉淀，以及在PEG和盐类物质存在时会出现过量的晶核。

3. 蛋白批次
在同一次条件筛选时，要避免样品不是同一批次纯化出来的。每一次纯化的条件和步骤都是不同的〔就像天下没有两片相同的树叶（Redondo添加）〕，所以筛选的时候应该使用同一批次纯化出来的蛋白。

4. 定性蛋白质
在拿去点晶体之前，应该定性判断你纯化出来的蛋白是不是你的目的蛋白。根据确定了的蛋白质性质，可以给筛选和优化提供参考。常用的蛋白质定性试验包括：
SDS-PAGE
Native PAGE
Dynamic Light Scattering
IEF (Isoelectric Focusing) Gel
Mass Spectros
根据这些试验的结果，我们可以判断：
蛋白样品的纯度
蛋白样品的同次性
不同批次纯化出来的蛋白的性质差异
蛋白质的稳定性

5. 蛋白需要达到什么纯度？
要拿去筛晶体，蛋白样品需要达到什么纯度？答案是越纯越好。但是这样一个答案不能让人满意。如何能更容易理解一些呢？一开始筛选时，根据考马斯亮蓝染色判断蛋白纯度应该达到90 到 95%。不过，考虑到总有进一步纯化的步骤，不可能达到‘绝对’的100%纯，所以没有必要追求‘绝对’纯，存在一点点的杂质蛋白是可以接受的。还要记住，结晶本身就是一个纯化过程。当筛选过程中没有晶体长出，甚至没有长的迹象，或者在优化条件时不能进一步提高晶体的质量了，这个时候就要考虑进一步提高蛋白浓度了。

6. 样品的保存
一般蛋白都可以在4°C 或 -70°C保存。与制备样品的人交流一下或者查阅文献中报道的类似蛋白的保存方法，选择一个合适的缓冲液体系和保存温度。在保存之前，应该测定蛋白的活性和稳定性，并隔一段时间取出一点蛋白来测定其活性是否改变及有没有降解发生。反复冻溶对蛋白是不利的，应尽量避免。样品应该分装成小份，每次取出当次试验需要的量，保证取出来的正好用完。有时候，一些人喜欢加入甘油（10 to 50% v/v）来保护蛋白不被冻伤。但是应该尽量避免加入甘油，因为甘油很难通过透析或者过滤来除干净，残存的甘油会给长晶体带来变数。甘油在不同条件下可能是沉淀剂，也可能是additive（促溶剂？）或冷冻保护剂。一般来讲，蛋白浓度越高越利于保存。但是，当蛋白浓度很高时，保存期间也容易产生沉淀。将保存的蛋白做好标记，是何批次纯化的，蛋白浓度多高，以及保存的时间等。将同一个批次的蛋白分装好保存到同一个大的离心管里，这样方便管理。

7. 蛋白样品操作中要注意的
Be nice to your protein.要记得蛋白可是微生物们的美餐，不要让它们偷吃了你的蛋白。平时，蛋白一定要在4° C或更低温度放置，暴露在室温的时间要尽可能地短。当溶化一个蛋白样品或将冷冻干燥的蛋白复溶的时候，不要摇晃或震荡，不要产生气泡，出现气泡往往标志着蛋白变性了。当确定了点晶体时操作间的温度，应预先将蛋白样品在这个温度放置一会儿。在蛋白结晶的领域里存在很多的不同的主张。比如，有人认为在点晶体之前应过滤蛋白除掉可能存在的细菌和蛋白聚集体及杂质等，而有人在认为不应该过滤或离心，那些并不明显的蛋白聚集体或杂质等可能是结晶所需的晶核。

8. 要不要加叠氮化钠？
NaN3是一种有效抑制细菌污染的添加剂。常用的工作浓度为1 mM或0.02% 到 0.1% w/v.因为叠氮化钠有毒，所以操作时一定要小心。当决定添加叠氮化钠了，就需要注意以下几点：
它能杀菌，对人体也是有害的。
它是某些蛋白的抑制剂，可能影响试验。
It can interfere with heavy atom derivatization.
一些叠氮化物是爆炸性的
有报道指出除掉叠氮化钠能促进晶体生长
可以替代叠氮化钠的试剂有麝香草酚（Thymol）和Thimerosal。
还有其他的方法，那就是每一步操作时都保证仪器和器材（灭菌枪头等）都是无菌的，溶液都要过滤除菌，并在4°C或更低温度保存。所有这些细节都做好了，就可以避免使用化学添加剂来防菌了。

9. 试验记录要做好
纯化，保存，点晶体等每一个步骤都应该详细记录。筛晶体时各个条件也都要做好记录以备需要时查阅。这些需要记录的项目包括：
有关这个蛋白的信息
样品名称
样品的纯化批次，保存地点及时间，保存条件等
蛋白缓冲液的成分，添加剂浓度等
样品浓度
结晶试验的信息
方法
液滴大小及成分
池液的成分
温度
日期
实验者
乍看起来这有些过于拘泥细枝末节，但是要知道所记录下的这些信息都可能成为结晶筛选的一个变量。做详尽准确的试验记录是必要的。在记录结晶的情况时，一些描述性的和定量的记录都应该有。最后，还有保持操作间的整洁卫生，避免化学物质和细菌的污染。好的习惯长远来看会让人受益良多。

10. 关于你的样品还应该掌握的信息：
是否有同源性很高的蛋白已经解出结构了？
样品中存在自由的半胱氨酸吗？
样品中有哪些添加剂？
样品上是否有糖基？
样品蛋白是否是磷酸化的？
样品N端是否甲基化？
样品在什么温度下稳定？
样品的活性和稳定性随温度如何改变？
样品的可溶性和稳定性随pH如何变化？
样品结合金属离子吗？
样品对蛋白酶敏感否？
我的样品属于酶，膜蛋白，抗体？
对这类的蛋白通常使用什么方法？
样品蛋白的来源？
蛋白样品到达我手上之前如何纯化和保存的？
样品的缓冲液体系？
是否同一批次纯化出来的？
我手上有多少蛋白？我还能获得多少？
蛋白纯度如何？
均一性同次性如何？
这个蛋白独特的性质是什么？

3. 提蛋白时，为什么要在4度下离心

主要是为了保持低温。因为离心本身也会产生一定的热，而蛋白在热的环境下可能变性或酶解，所以要在低温下进行离心。

4. 为啥血液离心时，离心机要在4°c

因为血液在离心时，由于离心机主轴及各部位轴承转动，会产生热量，而机内又是密闭的，热量无法散出，导致机内温度升高，血液中的蛋白质会失活变质，所以要加冷凝夹套。

5. 蛋白质分离提纯方法

1、盐析法：

盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

2、有机溶剂沉淀法：

有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

3、蛋白质沉淀剂：

蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

4、聚乙二醇沉淀作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。

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吸附层析

1、吸附柱层析

吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。

2、薄层层析

薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸层析操作进行展层。

3、聚酰胺薄膜层析

聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。

层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分离目的。

6. 表达蛋白收菌为什么要4度

低温主要是为了避免收集菌体或者发酵液的过程中可能出现的目的蛋白降解，变性。
一般较高的温度(37度）更适宜大肠杆菌的生长，当诱导完成之后如果继续保持较高温度，可能会增加菌液中的其他代谢产物，这些东西可能会造成目的蛋白的降解。而蛋白本身在大肠杆菌内折叠完成，如果温度过高，可能会使一些折叠好的但并不稳定的结构被破坏，造成蛋白变性。

7. 提蛋白时,为什么要在4度下离心

蛋白在低温时离心：1不损失活性 2抑制蛋白酶活性，防止离心时蛋白被分解

8. 一般蛋白质变性温度是多少

蛋白是一种极其重要的 营养元素，人体内绝大多数组织都需要蛋白来出示动能，因而，身体对蛋白的使用量是极大的。而蛋白是一种相对稳定的物质，仅有在一定独特标准下能会出现转性的主要表现，下边就讨论一下蛋白几度转性呢？期待大伙儿可以了解一下这些方面的内容吧。

蛋白质多少度变性

蛋白在40度以上就早已有转性的发展趋势，60度上下会刚开始转性。一般来说,食品中蛋白的遇热转性功效产生于约60℃。

蛋白是构成身体一切体细胞、组织的关键成份。机体全部关键的构成部分都需要有蛋白的参加。一般说，蛋白约占身体所有品质的18%，最重要的还是其与生命现象相关。

每顿饭食材必须有一定质和量的蛋白．身体没有为蛋白开设存储库房，假如一次服用过多的蛋白，必然导致消耗．反过来如食材中蛋白不够时，青少年儿童发育不全，成人会觉得困乏，体重下降，抗病能力变弱。

蛋白质多少度变性

服用蛋白要以充足的发热量供应为前提条件．假如发热量供应不够，身体将耗费食材中的蛋白来作电力能源。1克蛋白在身体空气氧化时出示的发热量是18kJ，与葡萄糖非常。用蛋白作电力能源是一种消耗，是屈才。

蛋白质多少度变性

蛋白在遭受阳光照射、热、溶剂及其一些变性剂的功效时，次级键受到损坏，造成纯天然构象的毁坏，使蛋白的生物活性缺失。假如转性标准强烈长久，蛋白的转性是不可逆的。假如转性标准不强烈，这类转性功效是可逆性的，表明蛋白质分子内部构造的转变并不大。这时候，假如去除转性要素，在适度标准下转性蛋白可修复其纯天然构象和生物活性，这类状况称之为蛋白复性。比如胃蛋白酶加温至80～90℃时，丧失溶解度，也无消化吸收蛋白的工作能力，如将温度再减少到37℃，则又可修复溶解度和消化吸收蛋白的工作能力。

9. 24 小时尿蛋白检测用尿收集时的温度

早上8时准应把膀胱内的尿量排清并弃去，开始计时，把24小时所排出的尿全部贮存在一容器内(包括第二天早上8时准解出的尿，全部送检查。温度没有太大的要求，但是不能太高

10. 提取蛋白酶离心时温度是多少

这要看具体是哪种蛋白酶了
一般情况下，为保护蛋白酶的活性离心温度是在4度~8度左右
某些特殊的蛋白酶可能在高一些温度下活性更高，所以离心温度要考虑合适该蛋白酶的活性的温度